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溶氧在(zài)發酵工程中的重要(yào)性
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發酵液中的溶氧濃度(Dissolved Oxygen ,簡稱DO)對微生物的生長和產物形成有著重要的影響。在發酵過程中,必須供給適量的無菌空(kōng)氣,菌(jun1)體(tǐ)才能繁(fán)殖和積累所需代謝產物。不同菌種及不同發酵階段 的菌體的需氧(yǎng)量是(shì)不同的,發酵液的DO值直接影響微生物的酶的(de)活性、代謝途徑及產物產量。發酵過程中,氧的(de)傳質速率主要受發酵液中溶解氧的濃度和傳(chuán)遞阻力 影響。研究溶氧(yǎng)對發酵的影響及控製對(duì)提高生產效(xiào)率,改善產品質(zhì)量等都有重要(yào)意義。

一、溶氧對發(fā)酵影響(xiǎng)
溶解氧對發酵的影響分為兩方(fāng)麵:一是溶氧濃度影響與呼吸鏈(liàn)有關的能量代謝,從而(ér)影響微生物(wù)生長;另一是氧直接參與產(chǎn)物合成。
(一)溶氧對微生物自身生長的影響
根 據對氧(yǎng)的需求,微生物可分為(wéi)專性好氧微(wēi)生(shēng)物、兼性好氧微生物和專性厭氧微生物。專性好氧微生物把氧作為最終電子(zǐ)受體,通過有氧呼吸獲取能量,如黴菌;進行 此類微生物發酵(jiào)時(shí)一般應盡(jìn)可能的提高溶解氧(DO),以促(cù)進微生物生(shēng)長,增大菌(jun1)體量(liàng)。兼性(xìng)好氧微生物的生長不一定(dìng)需要(yào)氧,但如果在培養中供給氧,則菌體生(shēng) 長更好,如酵母菌;典型如乙醇發酵(jiào),對溶DO的控製分兩個階段,初始提(tí)供高DO值進行菌(jun1)體擴大培養,後期嚴格控製DO進行厭氧發酵。厭氧(yǎng)和微好氧微生物能 耐受壞境中的氧,但它們的生長並不需要氧(yǎng),這些微生物在發酵生產中應用較少。而對於專性(xìng)厭氧微生物(wù),氧則可對(duì)其顯示毒(dú)性(xìng),如(rú)產甲烷杆菌,此時能否限製DO 在一個較低值往往成為發(fā)酵成敗的關鍵。
溶(róng)解氧對微生(shēng)物(wù)自身生長(zhǎng)的影響體(tǐ)現在多個方麵,其中對微生物酶的影響是不可忽略的重要因素。研究了不同溶(róng) 氧(yǎng)對穀氨酸發酵中兩(liǎng)個關鍵酶(méi)(穀氨(ān)酸脫氫酶GDH和乳酸脫氫(qīng)酶(méi)LDH)和代謝流的影響(xiǎng),研究表明,在過(guò)低溶氧條件下,TCA循環代謝流量減小,不足以平衡 葡萄糖酵解速率,從而刺激了LDH的酶(méi)活,使代謝流轉向乳酸生成,造成乳酸積累;而過高溶氧,GDH酶活明顯降低,且TCA循環流量(liàng)加大,生成大量 CO2,造成碳源損失(shī),兩(liǎng)種情況均不利於穀氨(ān)酸生成。
啤酒工業中,在啤酒的發酵階段(duàn),酵母的繁殖需要有足(zú)夠的氧氣,在除此之外的任何(hé)階段都應極 力避免氧的參與。啤酒(jiǔ)發酵液總含氧量由酒體溶解氧和瓶頸(jǐng)空氣(qì)兩部分組成,一般情況下,啤酒中的含氧(yǎng)量超過2PPM時對生產就有明顯的危害。[3]因為氧氣 的存在會(huì)促使酵母采取有氧呼吸的代謝途徑,從而破壞乙(yǐ)醇發酵的厭氧(yǎng)代謝過程。但是,研究表明無氧條件下發酵生成(chéng)的乙(yǐ)醇低於溶氧控製在1%-4%條件下生成 的乙醇。這主要是由於(yú)無氧條件下的(de)菌體量遠遠低於有(yǒu)氧條件下菌體量,而乙醇(chún)的生成與菌(jun1)體量有很大的聯係。
類似微生物發酵(jiào)的(de)活性汙泥法處理(lǐ)汙水的過 程中,DO的影響及(jí)控製也十分重要。曝氣池中(zhōng)氧氣不足和過(guò)量都會對微生(shēng)物生存環境帶來不利影響.當氧氣不足時,一方麵由於(yú)曝氣池(chí)中絲狀菌會大量繁殖,最終 產生汙泥膨脹;另一方麵會降低細菌分解的效(xiào)果,延長(zhǎng)處理時間,甚至導致生物處理(lǐ)失效.而氧氣過量(即過量曝氣)則(zé)會(huì)由於絮凝劑遭到破壞而導(dǎo)致懸浮固體沉降(jiàng) 性變差,同時使能(néng)耗過高(gāo)。
(二)溶氧對發酵產物的影響
對於好氧發酵來說,溶解氧通常既(jì)是營養因素,又是環境因(yīn)素。特別是對於具有一定氧化(huà)還原(yuán)性質的代謝產物的生產來說,DO的改變勢必會影響到菌株培養(yǎng)體係(xì)的氧(yǎng)化(huà)還原電位,同時也會對細胞生長和產物的形成產生影響。
在黃原(yuán)膠發酵中,雖然發酵液中的溶氧濃度對菌體生長速率影響不大,但是對菌體濃(nóng)度達(dá)到最大之後的(de)菌體的穩定期(qī)的長(zhǎng)短及產品質量卻有著(zhe)明顯的影響。
需氧微生物酶的活性對氧有著很強的(de)依賴性。穀氨酸發酵中,高(gāo)溶氧條件下乳酸脫氫酶(LDH)活性明顯比低溶氧條(tiáo)件(jiàn)下的LDH酶活(huó)要低,產酸中後(hòu)期穀氨酸脫氫(qīng)酶(GDH)的酶活下降很快,這可能是由於在高(gāo)溶氧條件下,劇烈的通氣和攪(jiǎo)拌(bàn)加劇了菌體的死亡速度和發酵活性的(de)衰減。
DO值的高低還會改變微生物代謝途徑,以致改變發酵環(huán)境甚至使目標產物發生偏離。研究表(biǎo)明,L-異(yì)亮氨酸的(de)代謝流量與溶(róng)氧濃度有密切關係,可以通過控製不同時期的溶氧來改變發酵過(guò)程中的代謝流分布,從而改(gǎi)變Ile等氨基酸合成的代謝流(liú)量。
二、溶氧量的控製
對 溶(róng)解氧進行控製的目的是把溶解氧濃度值穩定控製在一定(dìng)的期望(wàng)值或範圍(wéi)內。在微生物(wù)發酵過程中,溶(róng)解氧(yǎng)濃度與其它(tā)過(guò)程參數的關係(xì)極為複雜,受到生物反應器中 多種(zhǒng)物理、化學和微生(shēng)物因素的影響和製約。從氧的傳遞速率(lǜ)方程也可看出,對DO值的控製主要集中在氧的溶解和傳遞兩個方麵。
(一)控製溶氧量。 (C*-CL)是氧溶解的推動力,控製溶氧量首要(yào)因(yīn)素是控製氧(yǎng)分壓(C*)。高密度培養往往采用(yòng)通入純氧的方式提高氧分壓,而厭氧發酵則采用各(gè)種(zhǒng)方式將氧 分壓控製在較低水平。如(rú)啤酒發酵,麥汁充氧和酵母接種階段,一般(bān)要求氧含量達到8~10PPM;而啤酒發酵階(jiē)段,一般啤酒中的含氧量不得超過2PPM。
此(cǐ) 外,由於氧是難(nán)溶氣(qì)體(tǐ),一定溫度和壓力下,DO值有一上限(xiàn)。為此,向發酵液中加入氧載體(tǐ)是提(tí)高DO值的一個行之有效的方(fāng)法。實驗表明,在發酵基質中添(tiān)加 5%正十二烷,可明顯地提高發酵介質中的溶氧水平,改善供氧條(tiáo)件(jiàn),維(wéi)持溶氧的(de)相對穩定,增加菌體濃度(dù),提高L-天冬酞胺酶發酵水(shuǐ)平(21%左右)。
(二)控製氧傳遞速率。氧傳遞速(sù)率主要考慮(lǜ)KLa的影響(xiǎng)因素。從一定意義上講,KLa愈大,好氧生物反應(yīng)器的傳質性能愈好。
控(kòng) 製KLa的途徑可分為操作變量(liàng)、反應液的理化性質和反(fǎn)應器的結構3個部(bù)分。操作變量包括溫度、壓力、通風量和轉(zhuǎn)速(攪拌功率)等;發酵液的理化性質包括發 酵液的黏度、表麵張(zhāng)力、氧的(de)溶解度、發酵液的組成成分、發(fā)酵液的流動狀態、發酵類型等;反應器的結構指反應器的類型、反(fǎn)應器各部分尺寸的比例、空(kōng)氣分布器 的形式等。當然有些因(yīn)素(sù)是相互關聯的。
值得注意的是,在培養過程中並不是維持DO越(yuè)高越好。即使是專性好氣菌,過高的DO對生長可能不利。過量的氧形成(chéng)新生O,超氧化物O2-和過氧化(huà)物基O22-,破壞(huài)許多細胞組分,進而破壞微生物生長。
三、結束語
發 酵液(yè)中的氧含(hán)量對菌體生(shēng)長和產物形成都有著重要的影響,溶氧量(liàng)的控製主要從氧的溶解(jiě)和傳(chuán)遞兩個方(fāng)麵(miàn)考慮(lǜ)。隨著計(jì)算機和自動化技術的發展,發酵工業中從DO 的測(cè)量到分析控製都正逐步走向自動及控製一體化(huà)模式,研究利用DO作為補料的在(zài)線控製信號[9]將大大提高了發酵調控的準確性和(hé)自動化性能。
然(rán)而,在DO測量方麵目前使用較多的三種方法導管法,質譜電極法及電化學檢測法因均使用膜,在檢測精度和作為調控信號響應時間方麵還有待進一步(bù)提高。

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